Журнал «Актуальная инфектология» Том 9, №4, 2021
Вернуться к номеру
Визначення мішеней взаємодії препарату протефлазід і його активних структур із вірусом грипу
Авторы: Архипова М. (1, 2), Рибалко С. (2), Старосила Д. (2), Завгородня С. (3), Науменко К. (3), Дерябін О. (2), Пальчиковська Л. (4), Платонов М. (4), Завелевич М. (5)
(1) — Національний технічний університет України «Київський політехнічний інститут імені Ігоря Сікорського», м. Київ, Україна
(2) — ДУ «Інститут епідеміології та інфекційних хвороб ім. Л.В. Громашевського НАМН України», м. Київ, Україна
(3) — Інститут мікробіології та вірусології НАНУ ім. Д.К. Заболотного, м. Київ, Україна
(4) — Інститут молекулярної біології та генетики НАН України, м. Київ, Україна
(5) — Інститут експериментальної патології, онкології та радіобіології НАН, м. Київ, Україна
Рубрики: Инфекционные заболевания
Разделы: Медицинские форумы
Версия для печати
Пошук молекулярних мішеней речовин, що мають противірусну активність, у тому числі природного походження, є важливим для розробки нових противірусних засобів, які можуть бути ефективними у боротьбі з різними вірусними інфекціями. Останнім часом у центрі уваги фармакологів і вірусологів є речовини, що забезпечують взаємодію з кількома мішенями.
Метою цього дослідження було встановлення мішеней взаємодії препарату протефлазід і його біологічно активних речовин з вірусом грипу.
Матеріали та методи. Препарат протефлазід містить флавоноїдні глікозиди, виділені з диких злаків Deschampsia caespitosa L. (щучка дерниста), Calamagrostis epigeios L. (куничник наземний). Виділена мажорна фракція глікозильованого флавоноїду, яка представлена біологічно активною речовиною протефлазіду (БАРп) : [Tricin-7-О or 8-С glycoside] : [luteolin-7-О or 8-С glycoside] : [apigenin-7-О or 8-С glycoside] = (3 : 4 : 1) та синтезована подібна хімічна речовина БАРс. Молекулярні мішені взаємодії між препаратом протефлазід, його біологічно активними речовинами та вірусом грипу аналізували в клітинах MDCK, інфікованих вірусом грипу, і культивували у присутності композиції препарату протефлазід, його біологічно активних речовин або синтетичних флавоноїдних речовин. Для RT-PCR були розроблені праймери для генів PB2, PB1 та M1M2 вірусу грипу A/California/07/2009/H1N1 та праймер для гемаглютиніну вірусу грипу A/PR8. У вестерн-блотингу використовували поліклональні моноспецифічні антитіла проти вірусних білків PB1, PB2, PA, NP, M, NA, HA. Також було надано аналіз молекулярного докінгу.
Результати. Екстракти Deschampsia caespitosa L. та Calamagrostis epigeios L., що є основними компонентами препарату протефлазід, ефективно пригнічують реплікацію вірусу грипу A-PR8 (CC50 — 1,8 мкг/мл, EC50 — 0,0034 мкг/мл, IS — 529,4 та CC50 — 5,5 мкг/мл, EC50 — 0,0275 мкг/мл, IS — 200 відповідно). Ефективним є також комплекс біологічно активних речовин, виділених зі складу протефлазіду (CC50 — 240 мкг/мл, EC50 — 1,5 мкг/мл, IS — 160). Аналіз полімеразно-ланцюгової реакції вірусно-специфічної РНК з інфікованих вірусом грипу клітин, інкубованих з біологічно активними речовинами, виділеними з протефлазіду, виявив модифікацію гена РВ1 та зниження експресії рівня РНК М1М2 та РВ2 генів. Вестерн-блот-аналіз продемонстрував, що в інфікованих вірусом грипу клітинах, інкубованих з біологічно активними речовинами, виділеними з протефлазіду, полімеразний білок РВ1 та нейрамінідаза не виявляються при зниженні рівня білків М і РВ2. З’єднання з активним центром нейрамінідази та змодельованим PB2-зв’язуючим доменом полімерази вірусу грипу довело, що активні структури протефлазіду можуть ефективно зв’язуватися з цими сайтами.
Висновки. Біологічно активні флавоноїдні сполуки протефлазіду та синтетичні флавоноїдні сполуки могли б ефективно взаємодіяти з кількома мішенями вірусу грипу, зокрема з нейрамінідазою та полімеразними білками РВ1 та РВ2, забезпечуючи багатоцільову інгібуючу дію на реплікацію вірусу грипу.